Influence of the Degree of Ejaculate Dilution on the Results of the Assessment of Motility of Sperm of Breeding Bulls Obtained by Two Methods

Abstract

The experiment carried out aimed to examine the effectiveness of two methods of assessment of the parameters of sperm motility in thawed semen depending on the degree of its dilution. The semen was collected from 12 Simmental breeding bulls using an artificial vagina. Semen samples were pre-evaluated in terms of volume, colour, pH, viability, concentration and motility and then combined into one pooled sample to eliminate individual differences, cooled to 4°C, packed in 0.25 ml straw and frozen in liquid nitrogen, stored in a container at –196°C. Next they were thawed, divided into samples A, B and C, and subsequently diluted 1 : 10 (sample A), 1 : 20 (sample B) and 1 : 30 (sample C) and selected motion parameters were evaluated using conventional microscopic method and computer-aided (CASA). The obtained results were analysed statistically. The total sperm movement analysed by two methods in all tested samples differed significantly (p < 0.05). The spermatozoa progressive movement studied by the CASA system differed significantly from the one tested using the conventional method at dilution 1 : 20 and 1 : 30 (p < 0.05). The obtained results of the progressive movement at 1 : 10 dilution using both methods did not differ significantly. Studies have shown that mobility analysis carried out using the CASA system was characterized by greater accuracy and reproducibility of results than the conventional microscopic method. Moreover, the results of the following studies indicate the relationship between the degree of sperm dilution and the reproducibility of results.

Przeprowadzone doświadczenie miało na celu zbadania efektywności dwóch metod oceny parametrów ruchu plemników w nasieniu rozmrożonym, w zależności od stopnia jego rozrzedzenia. Nasienie pobrano od 12 buhajów rasy simentalskiej przy użyciu sztucznej pochwy. Próbki nasienia oceniono wstępnie pod względem objętości, barwy, pH, żywotności, koncentracji i ruchliwości, a następnie połączono w jedną próbę zbiorczą w celu eliminacji różnic indywidualnych, schłodzono do temperatury 4°C, zapakowano w słomki (0,25 ml) i zamrożono w ciekłym azocie po czym, przechowywano w kontenerze w temperaturze –196°C. Następnie rozmrożono, podzielono na próby A, B i C oraz rozrzedzono kolejno w stosunku 1 : 10 (próba A), 1 : 20 (próba B) i 1 : 30 (próba C); poddano ocenie wybrane parametry ruchu przy użyciu konwencjonalnej metody mikroskopowej oraz metody wspomaganej komputerowo (CASA). Uzyskane wyniki opracowano statystycznie. Całkowity ruch plemników analizowany dwiema metodami we wszystkich badanych próbach różnił się istotnie (p < 0,05). Ruch postępowy plemników badany w systemie CASA różnił się istotnie od badanego w przypadku użycia konwencjonalnej metody, przy rozrzedzeniu 1 : 20 oraz 1 : 30 (p < 0,05). Uzyskane wyniki ruchu postępowego przy rozrzedzeniu 1:20 z użyciem obu metod nie różniły się istotnie. Badania wykazały, że analiza ruchliwości przeprowadzona za pomocą systemu CASA cechowała się większą dokładnością i powtarzalnością wyników niż konwencjonalna metoda mikroskopowa. Ponadto wyniki poniższych badań wskazują na zależność pomiędzy stopniem rozrzedzenia nasienia a powtarzalnością wyników.